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CRISPR Cas9-D10A 切口酶质粒
CRISPR Cas9-D10A Nickase Plasmid
产品别名
CRISPR Cas9-D10A 切口酶质粒
CRISPR Cas9-D10A Nickase Plasmid
CAS9D10A Plasmid
CAS9D10A 质粒
基本信息
| NACRES | NA.51 |
| General description【一般描述】 | CRISPR Cas9-D10A切口酶表达质粒使用CMV启动子，可获得较强的Cas9瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。同时，使用XbaI酶切可使Cas9-D10A表达质粒线性化，得到基于T7的mRNA产物。 |
| Application【应用】 | 功能性基因组学/靶点验证
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| Features and Benefits【特点和优势】 | Cas9-D10A单个载体的应用可延伸至所有U6-向导RNA质粒。为优化Cas9与向导RNA的比例，可改变Cas9和向导RNA的用量。最新证据表明，CRISPR内切酶的脱靶效应是一个重要问题。为了解决这一问题，Sigma开发的配对切口酶技术可将CRISPR DNA识别域的长度延长至与ZFN和TALEN相近。我们的经验表明，基于Cas9-D10A突变体的配对切口酶是最可靠的。我们的开发工作也证明，产生活性配对切口酶的关键因素在于gRNA在5′至5′方向上的定位。对于配对CRISPR切口酶质粒的递送，我们建议使用由Cas9-D10A 表达载体和2个U6驱动型gRNA组成的三元系统。为了简化配对切口酶的使用，可通过Sigma的在线工具进入预设计配对切口酶库。请查看Sigma在线CRISPR产品，获取最新设计方案集。 |
| Components【组分】 | 1管含1μg 的Cas9-D10A 切口酶质粒。 请注意，该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。 |
| Principle【原理】 | CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统，可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件，即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA)，该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下，在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似，细胞随后会激活内源性DNA修复程序，即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR)，对目标DSB进行修复。 |
| Physical form【外形】 | Sigma Cas9-D10A切口酶质粒的产品形式是浓度为20ng/μl的50µl溶液。 |
| Preparation Note【制备说明】 | Sigma CRISPR质粒产品为小量提取包装，可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果，我们建议在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。 |
| Other Notes【其他说明】 | 为了介导DNA位点特异性双链断裂，必须与两条U6-gRNA质粒一起使用。 文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9-D10A 质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染) |
| Legal Information【法律信息】 | CRISPR使用许可协议 |
产品性质
| Quality Level【质量水平】 | 200 |
| recombinant【重组】 | expressed in E. coli |
| packaging【包装】 | vial of 50 μL |
| concentration【浓度】 | 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA) |
| Promoter【启动子】 | Promoter name: CMV |
| application(s) | CRISPR |
| selection | kanamycin |
| shipped in【运输】 | dry ice |
| storage temp.【储存温度】 | −20℃ |
安全信息
| Storage Class Code【储存分类代码】 | 12 - Non Combustible Liquids |
| WGK | WGK 1 |
