TEV蛋白酶

NA.54

烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶是从重组蛋白中去除融合标签的一种有用工具。
TEV蛋白酶具有(NIa)蛋白酶催化结构域，对应分子量27 kDa。其具有独特的高特异性，并在低温下具有活性。

TEV蛋白酶已用于从稻中去除重组有丝分裂原活化的蛋白激酶14 (MAPK14)、连接蛋白43(Cx43)c端片段和1-吡咯啉-5-羧酸还原酶中的组氨酸标签。它还可用于从人白血病细胞系K562洗脱纯化蛋白酶体。

烟草蚀刻病毒(TEV) 蛋白酶经过自溶作用，但TEV蛋白酶突变体具有自溶耐受性。细菌表达重组TEV蛋白酶存在产量和溶解度低的问题。使用绿色荧光蛋白融合TEV蛋白酶可克服这一问题，同时可用于结构基因组学研究。
链霉抗生物素蛋白-琼脂糖上的固定化TEV蛋白酶是融合蛋白切割的一种有效工具。 TEV蛋白酶也用于一项探究nlrp1b的蛋白水解加工用于炎症体活性的研究。
TEV蛋白酶具有严格的Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser7氨基酸切割识别序列。

经过优化设计和纯化可在较宽的温度范围内提高稳定性和高比活度。

一种含有GST和His标签的经修饰的52 kDa TEV蛋白酶构建体，用于使用谷胱甘肽或His-Select^®亲和介质进行轻松的去除。
TEV蛋白酶是烟草蚀刻病毒NIa蛋白酶的一种工程化催化结构域。 TEV蛋白酶是一种属于C4肽酶家族的高度特异性半胱氨酸蛋白酶。

在pH 8.0、温度30 ℃条件下，一单位的TEV蛋白酶可在一小时内切割>85% of 3 μg的对照底物。

在25 mM Tris HCl，pH 8.0，50 mM NaCl，1 mM NaCl，1 mM TCEP和50%甘油的溶液中以>=2 mg/ml提供
aqueous glycerol solution

切割实验方法
制备新鲜的透析缓冲液。应针对目标蛋白质的溶解度进行透析缓冲液的优化，并不含有蛋白酶抑制剂。 透析缓冲液应当与下游的纯化过程相兼容，如当采用HIS Select^®柱去除切割的组氨酸标签时尽可能低的EDTA或DTT量。
适合的透析缓冲液举例；25 mM Tris-HCl，pH 8.0，150 - 500 mM NaCl, 14 mM β-巯基乙醇
TEV蛋白酶在150 mM NaCl或500 mM NaCl以及400 mM咪唑中具有相同的活性。
用透析缓冲液将目标蛋白稀释至1-2 mg/ml。这是为了防止目标蛋白在透析缓冲液中发生聚集的可选步骤。保留少量的样品作为PAGE分析的对照。如果目标蛋白将会从HIS Select^™柱上进行洗脱并且EDTA与目标蛋白相兼容，则EDTA可被加入至0.5 mM的终浓度。
按蛋白酶与目标蛋白1:100(w/w)的比例加入TEV蛋白酶，或将10,000单位(1mg)的TEV蛋白酶加入至100 mg的目标蛋白中。无需计算摩尔比例。TEV蛋白酶可被直接加到目标蛋白中。无需更换缓冲液或稀释TEV蛋白酶。最佳的比例应根据经验进行确定。1:50至1:200的蛋白酶与目标蛋白的比例(w/w)可为绝大多数目标蛋白提供有效的范围。
针对透析缓冲液在4 ℃透析~16小时。透析是为了在使用HIS Select^®或谷胱甘肽亲和柱时去除咪唑或谷胱甘肽以在切割后去除切割标签或TEV蛋白酶。
通常，在4 ℃ 1mg的TEV蛋白酶可在16小时内切割>90%的100 mg对照蛋白。

HIS-Select is a registered trademark of sigma-aldrich Co. LLC
HiScreen is a trademark of Cytiva

200

expressed in E. coli

Contains both a histidine tag and a GST tag

solution

≥3,000 units/mg protein

27 kDa

wet ice

−20℃

12 - Non Combustible Liquids

WGK 2