胶原酶 来源于溶组织梭菌

3.4.24.3 ( BRENDA | IUBMB )

232-582-9

MFCD00130830

NA.54

胶原酶已被用于制备动脉组织，用于研究晚期糖基化终产物(AGE)。该酶还与其他蛋白酶一起用于人肿瘤、小鼠肾、人脑、肺上皮和许多其他组织的解聚。它在肝脏和肾脏灌注研究，胰腺消化和非实质肝细胞的分离中也是有效的。当测试该酶是否适合释放肝细胞时。对于每只大鼠肝脏，胶原酶以约 1mg/mL 使用，总体积为 100mL。
胶原酶(源于溶组织梭菌)用于解离组织样本，如脾脏和睾丸组织。

从组织中有效释放细胞需要胶原酶和中性蛋白酶的作用。胶原酶被每克摩尔酶 4 克原子钙(Ca²⁺)活化。培养滤液被认为含有至少 7 种不同的蛋白酶，分子量范围为 68-130 kDa(最适 pH 值：6.3-8.8)。该酶通常用于消化组织样品中的结缔组分以释放单个细胞。胶原酶治疗可导致一些细胞死亡。通常，用于消化的浓度为 0.1 至 5mg/mL。反应持续时间从 15 分钟到几小时不等，这使得能够有效地解离细胞而不会导致过多的细胞死亡。具有钙和 BSA 的 Krebs Ringer 缓冲液是优选的，并且 Zn²⁺ 是其活性所必需的。
每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化。 它被乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N，NN′,N′-四乙酸，β-巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基乙酸和8-羟基喹啉抑制。

根据提供，该产品在 -20℃ 下，可稳定保存一年。在 37℃、50℃ 和 -20℃ 下，30 天内 FALGPA 或蛋白酶活性没有损失。如果以等分试样(10mg/mL)快速冷冻，并且在 -20℃ 下冷冻，则粗胶原酶的溶液是稳定的。进一步的冻融循环会损坏溶液。 当在冰上保持时，该产品在 7 小时内保持 100％ 活性。

一个胶原蛋白消化单元(CDU)从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮氨酸，5小时，pH7.4,37℃，在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个中性蛋白酶单元水解酪蛋白，产生颜色和1.0 μmole 酪氨酸每5小时，pH7.5,37℃下产生的相同。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分钟水解1.0 μmole BAEE。

从 IV 型(C5138)制备。可以通过在 37℃ 下，将 0.05-0.1mg/mL 胶原酶溶解在含有 0.36mM 氯化钙(TESCA)(pH 7.4)的 50mM TES 缓冲液中来制备储备溶液。该产品还含有梭菌蛋白酶，非特异性中性蛋白酶和胰蛋白酶活性。

200

0.2 μm filtered

powder

≥125 CDU/mg solid
0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

68-130 kDa

release of physiologically active rat hepatocytes tested

diagnostic assay manufacturing

−20℃

GHS08

Danger

H334

P261 - P284 - P501

Resp. Sens. 1

11 - Combustible Solids

WGK 1

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves