碱性磷酸酶 (AP)

3.1.3.1 ( BRENDA | IUBMB )

正磷酸单酯磷酸水解酶(碱性最佳)
碱性磷酸酶催化从磷酸化的各种化合物中除去磷酸基团。它水解 DNA 和 RNA 中的 5′-单磷酸酯基团。它还可以从 RNA 中水解 5′-二磷酸和 5′-三磷酸基团。

热失活：AP 活性通过在 65℃ 温育被不可逆转地破坏。
去饱和取决于蛋白质浓度 - 使用低于 10 U/ml(0.1 mol/l 甘氨酸缓冲液，pH 10.5，1 mmol/l MgCl₂ 和 0.1 mmol ZnCl₂) ，AP 在 65℃ 孵育 10 分钟后失活。

从寡核苷酸和蛋白质核苷酸交换和释放中选择性切割末端磷酸基团。它还用于磷酸化样品，以区分磷酸酯部分(以磷酸化聚糖形式存在)和磷酸化氨基酸残基。

污染物： PDE <0.0004%，ADA 和 A-5-MP 脱氨酶 <0.004%

AP 是相同或几乎相同的亚基的二聚体；每一个都包含 2 个 Zn²⁺ 分子，一个紧密结合，且是结构稳定所必需的，另一个是松散结合的，且是催化活性所必需的。活性位点含有反应性丝氨酸。
在一些哺乳动物(例如人)中，至少存在 3 种可区分的同工酶：肠、胎盘，以及在骨/肝/肾中发现的形式。

单位转换：1 Roche 单位(在 +25℃ 下测试)对应约 2 至 2.5 Sigma 单位(在 +37℃ 下测试)。
AP 活性不以阿姆斯壮单位表示；国际单位的转换系数尚不清楚。
约 3.8 U(I 级 AP)或 4.0 U(II 级 AP)[+37℃，4-NPP 作为底物，二乙醇胺作为缓冲液，pH 9.8] = 1 U [+25℃，4-NPP 作为底物，甘氨酸作为缓冲液，pH 10.5]。

生化信息。 87(I 级 AP)：
1.0 U [+37℃，QC 测定条件] = 0.79 U [+ 30℃，QC 测定条件] = 0.57 U [+25℃，QC 测定条件]

悬浮液，溶剂为 3.2M 硫酸铵溶液，含有 1 mM MgCl₂，0.1 mM ZnCl₂，pH 约 7

• 活化剂：二价金属离子(Mg²⁺、Co²⁺、Mn²⁺)
• 氨基醇(2-氨基-2-甲基-1-丙醇，二乙醇胺)

注意，高浓度的氨基醇也可以作为竞争性抑制剂(例如二乙醇胺中的单乙醇胺)。

储存条件(工作溶液)：悬浮液的浓度 = 约 5 mg/ml。
如果再用含有 1 mM MgCl₂,0.1 mM ZnCl₂，pH 约为 7 的 3.2 M 硫酸铵溶液，稀释该悬浮液仅 5 至 10 倍，从一般经验看来，如果将其储存在 4℃，可能稳定几周(不保证！)。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

100

bovine (calf) intestine

suspension

~2000 units/mg protein (At 37 ℃ with 4-nitrophenyl phosphate as the substrate, and diethanolamine as the buffer (400 U/mg at 25 ℃ with 4-nitrophenyl phosphate as the substrate, and glycine as the buffer))

pkg of 1,500 U (10108138001)
pkg of 7,500 U (10108146001)

Roche

8.0-10.5

7.6 at 278 nm (10 mg AP/ml)

wet ice

2-8℃

12 - Non Combustible Liquids

WGK 1