碱性磷酸酶

3.1.3.1 ( BRENDA | IUBMB )

碱性磷酸酶可催化从磷酸化的各种化合物中除去磷酸基团。来自小牛肠的碱性磷酸酶可水解来自DNA和RNA的5′-单磷酸基团。它还可以从RNA中对5′-二磷酸和5′-三磷酸基团进行水解。

可使用这种小牛肠碱性磷酸酶制剂从DNA或RNA和免疫沉淀的RNA样品中去除5′-末端磷酸盐。
注意：11097075001制剂含有高浓度的酶(20 U/μl)，便于大规模实验。10713023001制剂的浓度较低(1 U/μl)，便于小规模实验。

AP是一种含锌酶，每分子含有4个锌原子(Efstradiatis，1977)。

一个单位的碱性磷酸酶的酶活力单位表示，其在检测条件下，在+ 37℃，1分钟内可水解1 mol 4-硝基苯基磷酸酯。
注意：根据Moessner 等的研究。5单位碱性磷酸酶(+37℃;二乙醇胺缓冲液)对应于1单位碱性磷酸酶(+25℃;甘氨酸/NaOH缓冲液)。

单位换算：约3.6 U(MB级AP)
[+37℃，4-NPP作为底物，二乙醇胺作为缓冲剂，pH 9.8] = 1U [+25℃，4-NPP作为底物，甘氨酸作为缓冲剂，pH 10.5]。

体积活力：11097075001制剂为20 U /μl。 10713023001制剂为1 U /μl。

10713023001：酶溶液(1 U/μl)，溶于储存缓冲液中，pH 7.6 (20 ℃)

11097075001：酶溶液(20 U/μl)，溶于储存缓冲液中，pH 7.6 (20 ℃)

工作溶液：Storage buffer: 25mM Tris-HCl，1mM MgCl₂，0.1mM ZnCl₂，甘油50％(v/v)，pH 7.6(4℃)。
储存条件(工作溶液)：储存缓冲液中的MB级AP稀释液(1至5 U/μl)在2至8℃下可稳定保存17个月。
较高的稀释度(~0.01 U/μl)应每天新鲜配制，并保存在2至8℃。
在克隆过程中防止载体的自我连接
如果线性化载体缺乏5′磷酸，则不能与自身连接或形成含有多个载体拷贝的连环体。因此，连接反应的产物主要则为重组DNA(载体+DNA插入物)，而不会是重新连接的质粒。
失活：向反应混合物中加入1/10体积的EGTA，并在+65℃下孵育10分钟。为确保酶完全失活，可通过苯酚/氯仿/异戊醇对混合物进行抽提以除去所有蛋白质。

用于一般实验室用途。

100

bovine (calf) intestine

solution

2 units/μg protein

pkg of 1,000 U (10713023001 [1 U/μl])
pkg of 1,000 U (11097075001 [20 U/μl])

Roche

37 ℃ optimum reaction temp.

7.5-9.5

wet ice

2-8℃

12 - Non Combustible Liquids

WGK 1