RT-PCR第一条链cDNA合成试剂盒(AMV)

100

sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions)

>50 units/μg protein

dNTPs included
hotstart: no

Roche

42 ℃ optimum reaction temp.

RT-PCR: suitable

purified RNA

dry ice

−20℃

1个试剂盒包含10种组分。

使用AMV RT进行第一链cDNA合成具有一定优势。与M-MuLV RT相比，AMV RT具有更高的热稳定性，与在+ 37℃进行的反应相比，在+ 42℃下进行的反应，具有更高的特异性和更好的二级结构解析度。
第一链cDNA合成试剂盒以两步RT PCR用作起始反应，合成第一链cDNA。本试剂盒包含用于第一链合成的逆转录酶AMV、两种不同引物、PCR核苷酸混合物和对照 Neo pa RNA。可以使用标准程序克隆RT-PCR生成的PCR产物。
扩增RNA需要将RNA底物转化为DNA。这一过程可以通过使用逆转录酶实现，例如使用AMV RT(禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶)或M-MuLV RT(莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶)。所得cDNA可用作标准PCR模板。
AMV RT在一个或多个位点合成新的cDNA链，而位点由所用引物的类型决定：

• 如使用Oligo-p(dT)₁₅用作引物，则位点在聚(A)mRNA的3′端
• 如使用随机引物p(dN)₆，则位点在沿着mRNA模板的非特异性点处，或
• 在由序列特异性引物确定的位点处。

热灭活：在95℃处理5min
逆转录酶AMV

用于RT-PCR(AMV)的第一链cDNA合成试剂盒适用于：

• 检测是否存在RNA病毒或其他含RNA的微生物(与PCR结合使用)
• 定量mRNA，监测特定mRNA的差异表达
• “差异显示mRNA”的第一步
• 生成cDNA文库，具有大范围和全长插入片段
• 逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)，将RNA逆转录成互补DNA

稳健性：

• 转录总RNA、mRNA和病毒RNA以及难以转录的二级RNA结构
• 获得最大12 kb的cDNA转录物
• 与M-MuLV逆转录酶相比，热稳定性(最高50℃)和特异性更好
• 无需在PCR反应之前纯化所得cDNA

灵活性：
可使用序列特异性引物、聚(dT)15引物或随机引物p(dN)6

在标准的cDNA合成分析中，使用1.0 μg Neo pa RNA模板与20 μ Ci [α-³²P]-dCTP(特异活性为3000 Ci/mmol)在+42℃下共孵育60分钟后，至少制备出300 ng cDNA(即30%的得率)。

体积活性：20 到 25 U/μl

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

组份不可单独销售
Reverse Transcriptase AMV
PCR Nucleotide Mix, pH 8.5 10 mM each
Reaction Buffer
MgCl₂ Stock Solution 25 mM
Gelatin 0.05% (w/v)
Oligo-p(dT)₁₅ , 0.02 A₂₆₀ units/μl 0.8 μg/μl
Random Primer p(dN)₆ , 0.04 A₂₆₀ units/μl 1.6 μg/μl
RNase Inhibitor 50 U/μl
Control Neo pa RNA (1.0 kb in length with additional 19-base 3′-poly(A) tail) 0.2 μg/μl
Water, PCR Grade

12 - Non Combustible Liquids

WGK 1